薄层层析
thin-layer chromatography;TLC
定义:将固定相与支持物制作成薄板或薄片,流动相流经该薄层固定相而将样品分离的层析系统。其特点是样品用量少,分析快速。按所用固定相材料不同,有吸附、分配、离子交换、凝胶过滤等薄层层析方法。
学科:生物化学与分子生物学_方法与技术_分离纯化技术_层析技术
相关名词:固定相 流动相 分离技术 显色剂
图片来源:视觉中国
【延伸阅读】
薄层层析是以涂布于载体上的基质为固定相,以液体为流动相,对混合样品进行分离、鉴定和定量的一种层析分离技术,常用于鉴定小分子物质和制备少量样品,如生物碱、氨基酸、单糖及其衍生物等。根据固定相的种类可分为吸附薄层层析、分配薄层层析和离子交换薄层层析等。
薄层层析操作方法一般为:薄板制备、点样、展层、显色和结果分析。薄板制备是将吸附剂和黏合剂按一定比例混合,加入适量水调匀,用涂布器将匀浆缓慢移过基底板,放置晾干,烘烤活化后即可使用。市面上有很多制好的薄层板,可直接使用。点样是用点样器将样品点样于薄层板上,点样点须保持在一条与底边平行的直线上,距底边≥1.5厘米。点样原点小而圆,直径≤2毫米,两点间隔≥1.5厘米。点样时务必注意不要损伤薄层表面。点样结束后,用电吹风吹干薄板。展层是将点好样的薄层板放入预先饱和的展层装置内,让点样一端进入展层剂中,其深度约0.5厘米。当展层剂上升至离薄层板另一端0.5至1厘米时停止展层,去除薄层板,用电吹风迅速吹干。显色和结果分析是将薄层板浸泡于显色剂中,有些薄层可采用喷雾法或紫外灯/荧光灯照射法显色,根据显色剂显出的斑点进行结果分析。
薄层层析具有以下优点:
1.展层时间短,分离混合物一般仅需15至60分钟;
2.设备简单、操作方便;
3.灵敏度高;
4.温度变化和溶剂饱和度对Rf值影响较小;
5.可使用腐蚀性显色剂。
责任编辑:张鹏辉